線粒體膜電位熒光探針JC-10

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線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒（JC-10 ）是一種以JC-10 為熒光探針，快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測(cè)。

JC-10 是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針。可以檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-10 聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-10 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí) JC-10 為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過(guò)熒光顏色的轉(zhuǎn)變來(lái)檢測(cè)線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來(lái)衡量線粒體去極化的比例。

線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過(guò) JC-10 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降，同時(shí)也可以用JC-10 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。

JC-10 單體的最大激發(fā)波長(zhǎng)為 515nm ，最大發(fā)射波長(zhǎng)為529nm ；JC-10 聚合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為585nm ，最大發(fā)射波長(zhǎng)為590nm 。實(shí)際觀察時(shí)，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

線粒體膜電位熒光探針JC-10

JC-10性質(zhì)：

　　1. 分子量：~600Da

　　2. 純度：≥95% （HPLC）

　　3. 儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。

　　4. 染色過(guò)程：

　　（1） 用DMSO將JC-10溶解，制得3mM的JC-10溶液（2mg/mL）。

　　注：建議分裝，任何未使用的小瓶應(yīng)儲(chǔ)存在

<-20℃。避免反復(fù)凍融循環(huán)，并避光.

　　（2） 準(zhǔn)備1X JC-10工作溶液：在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，解凍一份JC-10 stockolution到室溫。用Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7-8）稀釋制備10-30μM 1X工作溶液。通過(guò)votexing將它們混合均勻。

　　（3） 準(zhǔn)備測(cè)試用細(xì)胞模型（例如細(xì)胞凋亡模型），離心細(xì)胞，每管取1-5×10^5個(gè)細(xì)胞。

　　（4） 將細(xì)胞重懸于500μLJC-10工作溶液中。

　　（5） 在室溫或37°C，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育10至30分鐘，避光。注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個(gè)細(xì)胞類(lèi)型和細(xì)胞濃度。可嘗試優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。

　　（6） 使用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC通道）或流式細(xì)胞儀（使用FL1和FL2通道）監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm處的熒光變化。

　　注意事項(xiàng)：

　　為了您的安全和健康，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

　　JC-10 探針裝載完并洗滌后盡量在 30 分鐘內(nèi)完成后續(xù)檢測(cè)。

線粒體膜電位熒光探針JC-10